光度計(jì)物理學(xué)的UV法實(shí)現(xiàn)

   光度計(jì)是一種實(shí)用性較強(qiáng)且測(cè)試準(zhǔn)確的光學(xué)分析儀器，在平時(shí)測(cè)試過(guò)程原理當(dāng)中需要用到例如UV法來(lái)實(shí)現(xiàn)一些光度上的測(cè)量。光度計(jì)的UV法是在280nm波長(zhǎng)，直接測(cè)試蛋白與測(cè)試核酸類(lèi)似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，*的線(xiàn)性范圍在1.0-1.5 之間。實(shí)驗(yàn)中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個(gè)正常的現(xiàn)象。事實(shí)上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過(guò)1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。


   選擇Warburg 公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測(cè)定過(guò)程非常簡(jiǎn)單，先測(cè)試空白液，然后直接測(cè)試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm 的“背景”信息，設(shè)定此功能“開(kāi)”。

   漂移的原因是因?yàn)閃arburg 公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會(huì)被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測(cè)試較純凈、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì)。對(duì)于紫外線(xiàn)來(lái)說(shuō)可以之間定量法相對(duì)于比色法來(lái)說(shuō)速度會(huì)更加快，操作也較為簡(jiǎn)便，可以更加容易受到平行物質(zhì)的干擾，例如DNA的干擾就是其中之一，此外敏感度也是一方面因素，要求上來(lái)說(shuō)蛋白的濃度會(huì)高一些，所以光度計(jì)的UV法是一種光度計(jì)中*的一個(gè)物理學(xué)技術(shù)。